347 스테인리스 스틸 화학 성분 SARS-CoV-2에 특정한 정맥혈 또는 모세혈관의 양, T세포 반응에 따라 코로나19에 대한 면역력이 결정됩니다.

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347 스테인레스 스틸 화학 성분

스테인레스 스틸 347 코일 튜브 화학 성분

스테인레스 스틸 347 코일 튜브의 화학적 조성 및 기계적 특성은 다음과 같습니다.
- 탄소 – 최대 0.030%
- 크롬 – 17-19%
- 니켈 – 8-10.5%
- 망간 – 최대 1%

스테인레스 스틸 347 코일 튜브 기계적 성질

스테인레스 스틸 347 코일 튜브 제조업체에 따르면 347 코일 튜브의 기계적 특성은 다음과 같습니다.
- 인장 강도(psi) – 75,000분
- 항복 강도(psi) – 30,000분
- 신율(2인치의 %) – 최소 25%
- 브리넬 경도(BHN) – 최대 170

스테인레스 스틸 347 코일 튜브의 응용 및 용도

• Sugar Mills에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 비료에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 산업에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 발전소에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 식품 및 유제품에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 석유 및 가스 플랜트에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브.
• 조선 산업에 사용되는 스테인레스 스틸 347 코일 튜브 제조업체.

SARS-CoV-2 특이적 T 세포는 COVID-19의 감염과 진행을 예방하는 것으로 생각되지만 이에 대한 직접적인 증거는 없습니다.여기서 우리는 Lian의 혈액 수집 6개월 이내에 SARS-CoV-2 특이 인터페론-γ 양성 T 세포의 전혈 측정치를 양성 코로나19 진단 테스트 결과(PCR 및/또는 측방 혈류)와 비교했습니다.정맥혈 샘플을 기증한 148명의 참가자 중 SARS-CoV-2 특이적 T 세포 반응의 규모는 감염된 사람보다 보호 상태를 유지한 사람에서 유의하게 더 높았습니다(P < 0.0001).% 감염 위험이 있는 반면, 고강도에서는 이 위험이 5.4%로 감소했습니다.이러한 결과는 인구 규모의 T 세포 면역 데이터에 대한 접근을 용이하게 할 수 있는 확장 가능한 모세 혈관 분석을 테스트한 추가 299명의 참가자에게 일반화되었습니다(14.9% 대 4.4%).따라서 SARS-CoV-2에 특이적인 T 세포 측정은 감염 위험을 예측할 수 있으며 개인 및 집단의 면역 상태를 모니터링할 때 평가되어야 합니다.
SARS-CoV-2 감염에 대한 면역 반응을 측정하고 이해하는 것은 향후 COVID-19 발생으로 인한 공중 보건 및 경제적 영향을 최소화하기 위한 효과적인 미래 전략을 개발하는 데 중요합니다.면역 상관관계의 식별은 바이러스 감염에 대한 집단의 민감성에 대한 중요한 정보를 제공하고 최대 입원 기간에 대한 조기 경고를 제공하며 또한 사람들이 자신의 감염 위험과 다른 사람을 감염시킬 위험을 개인적으로 관리할 수 있게 해줍니다.면역 감시는 건강하고 고위험 환자1,2,3, 특히 SARS-CoV-24 돌연변이의 경우 코로나19 백신의 효과를 평가하는 데 매우 중요한 것으로 입증되었으며, 면역 저하가 발견되면 면역력을 강화해야 합니다. 미래의 발병.
SARS-CoV-2 감염에 대한 개인의 면역 수준은 노출 당시의 바이러스 수치, 바이러스 변종, 연령, 이전 예방접종/감염 상태, 동반질환, 약물, 가장 중요한 항 SARS-CoV 감염 등 여러 요인에 따라 달라집니다. .2 적응면역반응은 바이러스에 노출되는 시점에 일어난다5.SARS-CoV-2 감염 및/또는 예방접종에 대한 면역 반응 평가는 구조 단백질(예: 스파이크 당단백질)에 특이적인 항체의 존재를 측정하는 혈청학적 분석에 중점을 두었습니다.그러나 항체의 유무만으로는 보호 면역 반응을 정확하게 판단할 수 없습니다. 반응은 시간이 지남에 따라 상당히 약화되고6 회복자 또는 이중 백신 접종을 받은 개인의 SARS-CoV-2 변종 중화에 따라 약한 활성으로 인해 대규모 면역 반응으로 이어질 수 있습니다. 획기적인 감염자 수7.실제로 Omicron 변종(B.1.1.529)으로 인한 증상이 있는 코로나19에 대한 보호는 mRNA 백신 접종 4~6개월 후에 약 10%로 감소했지만, 심각한 질병에 대한 보호는 최소 7개월 동안 68% 이상 지속되었습니다8.바이러스 감염에 대한 장기적인 보호를 제공하는 적응 기억 T 세포 반응을 측정하는 것은 SARS-CoV-2 감염에 대한 민감성을 나타내는 가장 좋은 지표이며 따라서 특정 T 세포는 감염을 예방할 수 있습니다.혈청전환 없이10,11.그러나 T 세포 반응의 측정은 특히 백신 효능을 평가하고 면역성을 모니터링하기 위한 대규모 관찰 연구를 수행할 때 정맥혈 샘플을 확보하고 운반하는 데 있어 방법론적 어려움과 물류 문제로 인해 덜 주목을 받아 왔습니다.그러나 백신 접종을 받은 개인은 SARS-CoV-2 변종에 대해 강력한 T 세포 활성을 보여 잠재적으로 항체 반응성 손실을 상쇄하여 COVID-1912의 중증도를 제한합니다.
여기에서 우리는 SARS-CoV-2 T 세포 반응에 대한 단일 측정으로 이전 면역 영향 요인에 관계없이 혈액 채취 후 6개월 이내에 SARS-CoV-2 감염의 절대 위험을 예측할 수 있는지 이해하려고 했습니다.T 세포 테스트를 높은 처리량으로 만들고 대규모 연구에 적용하기 위해 모세혈관 손가락채혈 혈액 샘플을 사용하여 수행할 수 있도록 테스트를 소형화하려고 노력했습니다.
우리는 전정맥혈을 기반으로 한 SARS-CoV-2 T 세포와 IgG 항체의 결합 검출을 사용하여 건강한 기증자의 세포 및 체액성 면역 반응을 측정했습니다(참가자 특성은 2022년 3월 14일 참조). 특정 T 세포 반응은 SARS-CoV-2 펩타이드(이전 참조 14,15,16,17,18)를 사용한 전혈 자극 후 혈장 인터페론-γ(IFN-γ) 수준을 측정하여 결정되었으며 관련 IgG 반응 뉴클레오캡시드(N)는 이전 감염을 보고한 사람들에서 증가했지만 두 반응 모두 이전에 감염된 백신을 접종하지 않은 공여자에서 더 높았으며 신체에서 최대였습니다(그림 1a, b).스파이크 당단백질(RBD, S1, S2)에 대한 IgG 반응 이전에 감염된 예방 접종 기증자에서 가장 높았습니다 (그림 1c-e).
a SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응은 정맥 전혈 분석으로 측정되었으며 참가자의 예방접종 및 이전 SARS-CoV-2 감염 상태(PCR 및/또는 측면 흐름 테스트로 확인됨)를 기반으로 했습니다.' Vac + /Inf +' n = 60(녹색), 'Vac + /Inf-' n = 82(파란색), 'Vac-/Inf +' n = 4(노란색), 'Vac-/Inf-' n = 1 (적용되지 않은).SARS-CoV-2 특이적 IgG 결합 반응은 뉴클레오캡시드("N")(b; ****P < 0.0001, **P = 0.0016), 스파이크 수용체 결합 도메인("RBD")(c; **)을 표적으로 합니다. P = 0.0022, *P < 0.015), 스파이크 하위 단위 1("S1")(d; ***P = 0.0005, *(Vac + /Inf+ 대 Vac + /Inf-) P = 0.022, *(Vac- /Inf+ 대 Vac+/Inf-) P = 0.012) 및 피크 하위 단위 2("S2")(e)는 정맥 전혈 검사로 측정되었으며 참가자 백신 접종 및 이전 SARS -CoV-2(PCR로 확인 및/ 또는 측면 흐름 테스트) 감염 상태.'Vac + /Inf +' n = 60(녹색), 'Vac + /Inf-' n = 71-82(파란색), 'Vac-/Inf +' n = 4(노란색).비교는 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 이루어졌으며 Dunn 테스트를 사용한 다중 비교를 위해 조정되었습니다.데이터는 최소값과 최대값에 수염이 있는 차트(중앙값 중앙선, 75번째 백분위수 상한, 25번째 백분위수 하한)로 표시됩니다.각 점은 기증자를 나타냅니다.원시 데이터는 원시 데이터 파일 형식으로 제공됩니다.
혈액 샘플링 후 참가자들은 코로나19에 대한 양성 PCR 및/또는 측면 흐름 테스트 결과를 자가 보고하도록 요청받았습니다.참가자가 2021년 9월 1일부터 2021년 12월 29일 사이에 양성 반응을 보인 경우, 2021년 12월 29일 이후 공중 보건 웨일즈에 따르면 델타(B.1.617.2) 변종 코로나바이러스 및 Omicron(B.1.1.529)에 감염된 것으로 추정됩니다. 이 우려 사항이 지배적이 됩니다.평가 가능한 기증자 148명 중 헌혈 6개월 이내에 26.3%(39/148)의 감염률을 관찰했으며, 이 중 38명이 코로나19 백신 2차 또는 3차 접종을 받았습니다. BNT162b2) mRNA 백신 또는 AstraZeneca 백신(ChAdOx1 nCoV-19));예방접종을 받지 않은 기증자도 감염되었습니다.SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ 양성 T 세포 반응의 크기는 감염되지 않은 기증자에 비해 COVID-19에 대한 양성 진단 테스트를 보고한 환자에서 유의하게 낮았습니다(P < 0.0001; 그림 2a). 일부 참가자의 백신 접종에 의한 T 세포 반응의 최적 유도(P = 0.050, 보충 그림 1).IFN-γ+ T 세포 반응의 규모와 코로나19 검사 결과가 양성으로 나오는 시간 사이에는 상관관계가 없었습니다(보충 그림 2).대조적으로, RBD-, S1-, S2-결합 IgG 반응(그림 2b-d)이나 RBD-, S1-중화 항체 반응은 야생형 또는 델타 SARS-CoV-2(B.1.617)에 특이적이지 않았습니다.) (보충 그림 3)은 감염 위험이 있는 사람을 구별할 수 있습니다.그러나 SARS-CoV-2에 대한 낮은 N-연결 IgG 반응은 COVID-19 감염 위험과 상관관계가 있었습니다(P = 0.0084, 그림 2e).양성 반응을 보인 사람들은 확률이 85% 낮았습니다(P = 0.00035; OR 0.15, 95).% CI: 0.047-0.39(보충 그림 4).
건강한 기증자(n = 148)의 정맥혈 샘플을 통해 SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응(a; ****P < 0.0001)과 특정 SARS-CoV에 대한 스파이크 수용체의 결합을 평가했습니다. -2 자극.도메인("RBD")(b), 스파이크 1 서브유닛("S1")(c), 스파이크 2 서브유닛("S2")(d) 및 뉴클레오캡시드("N")(e; **P = 0.0084) .코로나19(PCR 및/또는 측면 흐름) 양성 반응을 보인 참가자가 확인되었습니다.모든 감염은 혈액 채취 후 6개월 이내에 발생했습니다.양측 Mann-Whitney 테스트를 사용하여 비교를 수행했습니다.데이터는 최소값과 최대값에 수염이 있는 차트(중앙값 중앙선, 75번째 백분위수 상한, 25번째 백분위수 하한)로 표시됩니다.각 점은 기증자를 나타냅니다.ns는 중요하지 않습니다.히트맵 f는 지정된 데이터 세트에 대한 변수 간의 Spearman 순위 상관 관계를 보여줍니다.통계적으로 유의미하지 않은 비교는 매트릭스에서 제외되고 빈 셀로 표시되었습니다.원시 데이터는 원시 데이터 파일 형식으로 제공됩니다.
미리 설정된 진단 양성 기준치 14는 재감염 위험을 평가하기에는 너무 임의적인 것으로 간주되어 절대 위험 매개변수를 설정하기 위해 사분위수 범위가 설정되었습니다.결과에 유의미한 영향을 미치는 변수만 포함된 통계 모델은 SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응의 규모가 개인의 감염 가능성을 결정하는 데 가장 중요한 면역 바이오마커임을 보여주었습니다. 코로나19 테스트를 받았습니다.-19 양성(그림 2f 및 보충 그림 4).세 번째(194-489 pg/ml IFN-γ) 및 네 번째(>489 pg/ml IFN-γ) 사분위수에서 SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응을 보이는 환자 65%(P = 0.055; OR 0.35, 95% CI: 0.11–1.00) 및 90%(P = 0.0050; OR 0.098, 95% CI: 0.014–0.42)에 더 많은 참가자가 있었습니다.가능성은 희박합니다 (보조 그림 4).전체적으로, 정맥혈 79pg/mL 이하의 IFN-γ에서 SARS-CoV-2 특이적 T 세포 반응을 보인 참가자는 반응이 489pg/mL를 넘는 것에 비해 6개월 후 돌발 감염 위험이 43.2%였습니다.ml의 IFN-γ는 감염 위험이 5.4%였습니다(표 2).
정맥 전혈 검사는 채혈 전문의가 검체를 채취해야 하기 때문에 범위가 제한되어 있습니다.SARS-CoV-2에 대한 T 세포 및 IgG 검사의 가용성을 높이기 위해 참가자가 집에서 손가락채혈 혈액 샘플을 얻을 수 있도록 대체 모세혈 샘플 채취 방법이 개발되었습니다.우리가 아는 한, 모세혈관 혈액 샘플에서 항원 특이적 T 세포 기능을 측정한 이전 보고서는 없었습니다.유사한 모세혈액과 정맥혈 샘플을 사용하여 얻은 림프구 수 사이에는 이전에 강한 상관관계가 있는 것으로 나타났습니다.또한 SARS-CoV-2 특이적 T 세포 반응을 측정하는 전혈 기반 분석에서는 320μL의 정맥혈만 사용하는 것으로 보고되어20 모세혈관 샘플에서 전구 T 세포의 빈도에 대한 우려를 해소했습니다.
우리는 모세혈관 전혈을 기반으로 한 SARS-CoV-2 T 세포 및 IgG 항체의 높은 처리량 표준화 공동 분석을 사용하여 다양한 동반 질환 및 이전 예방접종/감염 상태가 있는 참가자의 세포 및 체액성 면역 반응을 측정했습니다(표 1).2022년 1월 24일부터 3월 14일까지 영국 전역에서 모집214. 손가락 샘플의 대부분(90.9%)이 올바르게 채취되어 수집 후 24시간 이내에 실험실로 보내졌습니다.어떤 경우에는 채혈 후 48시간 이내에 샘플을 받았지만 이들 샘플 중 어느 것도 품질 관리 검사를 통과하지 못했고 전체 T 세포 또는 항체 측정에 영향을 미치지 않았습니다 (보충 그림 5).일부 개인의 모세혈관 및 정맥혈 샘플에서 측정된 SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응의 크기에는 차이가 있었지만 전체적으로는 유의미한 차이가 없었습니다(P = 0.88, 보충 그림 6). ).).
SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응은 이전 감염을 보고한 백신 접종자에게서 유의하게 증가했지만(P = 0.0001), 이전에 감염된 백신을 접종받지 않은 기증자 개인보다 유의하게 높지는 않았습니다(P = 0.19, 그림 2). 3a).).스파이크 당단백질(RBD, S1, S2)에 대한 IgG 반응은 이전 감염 상태와 관계없이 백신 접종을 받지 않은 기증자보다 백신 접종을 받은 기증자에서 유의하게 더 높았습니다(그림 3b-d).흥미롭게도, 평균 N-결합 IgG 반응은 백신 접종 참가자에 비해 이전에 감염된 백신 접종을 받지 않은 참가자에서 가장 높았지만 이는 유의미한 수준에는 도달하지 못했습니다(그림 3e).백신 접종을 받지 않았거나 감염되지 않았다고 자가 선언한 기증자 중에서 참가자 37명 중 15명(40.5%)이 N-연결 IgG에 대해 양성 반응을 보였는데, 이는 이전에 확립된 기준치인 2.0 BAU/mL14를 초과했습니다.이들 15명의 참가자 이들 환자 중 12명은 이전에 설정된 역치인 22.7pg/mL IFN-γ14를 초과하는 IFN-γ+ T 세포 반응에 대해 양성 반응을 보였습니다.따라서 이들 참가자는 이전에 SARS-CoV-2에 감염되었으며 개인적인 선택, PCR 및/또는 측면 흐름 장비 부족으로 인해 코로나19 검사를 받지 않았거나 무증상이었을 가능성이 높습니다.백신을 접종하지 않은 공여자의 IFN-γ+에 대한 T 세포 반응과 N-연결 IgG 수준 사이에는 유의한 상관관계가 있었지만(P = 0.0044; 보충 그림, N-연결 IgG 반응은 N-연결 IgG 반응보다 빠르게 감소한 반면, IFN-γ + T 세포 반응은 백신 접종 상태와 상관없이 유지되었지만 챌린지 후 50주째 기증자 수는 낮았습니다(보충 그림 8). 백신 접종 유형은 일반적으로 SARS-CoV-2, T에 특이적으로 관찰된 IgG 반응에서 거의 다르지 않았습니다. 두 가지 용량의 BNT162b2를 접종한 후 mRNA1273 재백신을 접종한 참가자는 상당히 높은 수준의 IFN-γ + T 세포가 두 가지 용량의 ChAdOx1 및 BNT162b2를 받은 참가자보다 SARS-CoV-2에 더 민감했습니다(보충). 그림 9) 또한, 보고된 동반질환은 건강한 기증자와 비교하여 관찰된 T 세포 반응에서 전반적인 차이가 거의 없었습니다(보조 그림 10).
SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응은 전혈 모세관 분석으로 측정되었으며 참가자의 예방접종 및 이전 SARS-CoV-2 감염 상태(PCR 및/또는 측면 흐름 테스트로 확인)를 기반으로 했습니다.'Vac + /Inf +' n = 42(녹색), 'Vac + /Inf-' n = 158(파란색), 'Vac-/Inf +' n = 33(노란색), 'Vac- /Inf-' n = 37(회색).****P < 0.0001, ***P = 0.0001, *(Vac+/Inf- 대 Vac-/Inf-) P = 0.045, *(Vac-/Inf+ 대 Vac- /Inf-) P = 0.014 .스파이크 수용체 결합 도메인("RBD")에 대한 SARS-CoV-2 특이적 IgG 결합 반응(b; ****P < 0.0001, ns: 유의하지 않음), 스파이크 하위 단위 1("S1")(c; * * **P < 0.0001, ns: 중요하지 않음), 스파이크 하위 단위 2("S2")(d; ****P < 0.0001, ***P = 0.0005, *P = 0.016 ) 및 뉴클레오캡시드("N") (e; ****P < 0.0001, ns 유의하지 않음)은 정맥 전혈 분석을 사용하여 측정되었으며 참가자의 예방접종 및 이전 SARS-CoV-2(PCR 및/또는 측면 흐름 분석으로 확인됨)를 기반으로 감염은 다음과 같이 세분화되었습니다. 상태.'Vac + /Inf +' n = 46(녹색), 'Vac + /Inf-' n = 182(파란색), 'Vac-/Inf +' n = 34(노란색), 'Vac-/Inf-' n = 37(회색).비교는 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 이루어졌으며 Dunn 테스트를 사용한 다중 비교를 위해 조정되었습니다.데이터는 최소값과 최대값에 수염이 있는 차트(중앙값 중앙선, 75번째 백분위수 상한, 25번째 백분위수 하한)로 표시됩니다.각 점은 기증자를 나타냅니다.원시 데이터는 원시 데이터 파일 형식으로 제공됩니다.
이전과 마찬가지로 참가자들은 코로나19에 대한 양성 PCR 및/또는 측면 혈류 결과를 보고하도록 요청받았습니다.영국 보건청에 따르면, 참가자들은 연구 기간 동안 영국에서 지배적인 변종이었기 때문에 양성 바이러스 변종을 테스트할 당시 Omicron 코로나바이러스(B.1.1.529)에 감염된 것으로 추정되었습니다.299명의 평가 가능한 기증자 중 모세혈관 기증 3개월 이내에 8.0%(24/299)의 감염률을 관찰했으며 그 중 7명은 예방접종을 받지 않았습니다.전체 참가자 중 동반질환 비율은 코로나19 음성 판정자(24.4%, 표 1)보다 코로나19 양성 판정자(10.7%)에서 더 낮았습니다. 이는 참가자가 특정 질환을 앓고 있다는 사실에 기인할 수 있습니다. 질병은 더 조심스럽고 당뇨병이나 암과 같은 잠재적인 결과로부터 보호합니다.정맥혈 코호트에서 관찰된 바와 같이, SARS-CoV-2 특이적 인터페론-γ(IFN-γ) 양성 T 세포는 코로나19에 대한 양성 진단 테스트를 보고한 개인의 모세혈관 혈액 샘플에서 측정되었습니다.백신 접종 및 / 또는 이전 감염에 의한 T 세포 반응의 유도가 상대적으로 낮기 때문에 반응 규모는 감염되지 않은 기증자 ( P = 0.034, 그림 4a)보다 상당히 낮았습니다 (보충 그림 11).마찬가지로 RBD-, S1-, S2-결합 IgG 반응(그림 4b-d)이나 RBD-, S1-중화 항체 반응 모두 야생형 또는 델타 SARS-CoV-2(B. 1.617)에 특이적이지 않았습니다.(보조 그림 12).심각한 감염 위험이 있는 개인을 식별할 수 있습니다.정맥 코호트와 대조적으로, N 관련 IgG 반응 역시 코로나19 위험을 구별하지 못합니다(그림 4e). 이는 최근 설명된 바와 같이 Omicron 변종(B.1.1.529)이 이전에 감염된 개인의 면역 회피를 증가시킨다는 것을 시사합니다 21. 대조적으로, SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ T 세포 반응의 강도는 다시 한 번 코로나19 양성 반응의 개별 확률을 결정하는 데 가장 중요한 변수였습니다(그림 4f).전체적으로, SARS-CoV-2 특이적 모세혈관 T세포 반응이 23.7pg/mL 이하인 IFN-γ 참가자는 141.6pg/mL 이상의 반응에 비해 3개월 후 감염 위험이 14.9%였습니다.ml IFN.-γ의 감염 위험은 4.4%였습니다(표 2).
SARS-CoV-2(a; *P = 0.034) 및 SARS-CoV-2 특이적 IgG 표적 수용체 결합 도메인("RBD")(b)에 특이적인 IFN-γ+ T 세포 반응, 스파이크 서브유닛 1(' S1')(c), 스파이크 서브유닛 2('S2')(d) 및 뉴클레오캡시드 결합 반응('N')(e).코로나19 검사(PCR 및/또는 측면 혈류 검사)에서 양성으로 확인된 참가자는 혈액 샘플링 후 3개월 이내에 모든 감염이 발생했습니다.양측 Mann-Whitney 테스트를 사용하여 비교를 수행했습니다.데이터는 최소값과 최대값에 수염이 있는 차트(중앙값 중앙선, 75번째 백분위수 상한, 25번째 백분위수 하한)로 표시됩니다.각 점은 기증자를 나타냅니다.ns는 중요하지 않습니다.히트맵 f는 지정된 데이터 세트에 대한 변수 간의 Spearman 순위 상관 관계를 보여줍니다.통계적으로 유의미하지 않은 비교는 매트릭스에서 제외되고 빈 셀로 표시되었습니다.원시 데이터는 원시 데이터 파일 형식으로 제공됩니다.
코로나19 팬데믹의 다음 단계로 접어들면서 초점은 예방에서 개인 위험 관리 및 취약한 사회 구성원 식별로 전환될 것입니다.이러한 고위험군을 효과적으로 식별하고 치료하려면 코로나19에 대한 면역 상관관계를 확립하는 것이 중요합니다.이제 T 세포 면역이 SARS-CoV-2 감염을 예방하고 COVID-1910의 심각성을 제한한다는 증거가 늘어나고 있습니다.여기에 제시된 데이터는 스파이크, 막, 뉴클레오캡시드 구조 단백질에 대한 SARS-CoV-2 특이적 IFN-γ+ T 세포 반응의 결합된 강도가 항체 결합보다 코로나19에 대해 더 큰 보호를 제공한다는 것을 보여줍니다.19 반응을 촉진하거나 중화합니다. .개인 및/또는 집단 면역을 평가할 때 고려해야 합니다.SARS-CoV-2 또는 인플루엔자 A 바이러스(IAV)와 같은 RNA 바이러스는 항체가 인식하는 표면 항원의 노출된 B 세포 에피토프를 빠르게 진화시켜 혈청학적 중화를 피합니다.T 세포에 의해 제공되는 보호 면역 반응은 면역 반응을 신속하게 벗어날 수 없는 바이러스 단백질의 보다 보존된 영역으로부터의 에피토프의 표적화를 반영할 수 있습니다.새로운 SARS-CoV-2 변종에 대한 T 세포 매개 보호는 IAV22,23 아형에서 볼 수 있는 보존된 내인성 단백질의 T 세포 표적화에 의해 매개되는 이형 아형 보호와 유사합니다.
코로나19에 대한 세포 면역 반응을 측정할 수 있는 엄청난 잠재력에도 불구하고 정확하고 처리량이 높은 표준화된 T 세포 분석법의 개발에는 상대적으로 관심이 거의 이루어지지 않았습니다.T 세포 반응 측정과 관련된 전통적인 복잡성 및 비용으로 인해 대규모 집단 면역을 스크리닝할 때 T 세포 면역의 정확한 결정이 불가능합니다.여러 상업용 전혈 펩타이드 자극 분석법이 최근에 이용 가능하게 되었지만 현재 모든 사람들은 혈액을 얻기 위해 채혈 전문의가 필요하므로 가용성과 규모가 제한됩니다.모세혈관 시스템은 인구 집단에서 SARS-CoV-2 항체의 유병률을 확인하는 데 널리 사용됩니다.우리는 SARS-CoV-2 구조 단백질 및 SARS-CoV-2 특이적 항체 반응에 대한 T 세포 반응성을 평가하기 위해 전혈 펩타이드 자극 분석을 수행하기 위해 모세혈관 분석을 적용했습니다.실제로 동일한 모세혈관 혈액 샘플에서 SARS-CoV-2 특이적 항체와 T 세포를 결합하여 측정하는 것은 매우 매력적입니다. (i) 참가자당 여러 혈액 검사의 필요성을 줄이고, (ii) 참가자의 경험과 이해를 향상시킵니다.(iii) 물류를 개선하고 중복을 줄입니다. (iv) 실험실 소모품과 시료 전달이 덜 필요하므로 환경에 미치는 영향을 줄입니다.전체적인 IFN-γ 반응성은 일치하는 정맥혈과 모세혈관 샘플 사이에서 유사했지만, 정맥혈 코호트(그림 2a)와 비교하여 참가자의 모세혈관 혈액 코호트(그림 4a)에서 더 낮은 것으로 관찰되었습니다.IFN-γ 값 이 발견에 대한 설명은 여러 가지가 있습니다. 즉, 면역억제 요법이 필요한 동반 질환이 있는 다수의 참가자가 모세혈관 혈액 샘플링 코호트(표 1)에 모집되었으며 혈관에서 얻은 T 세포의 생존 가능성 및/또는 기능 특히 펩타이드 자극 전 샘플의 장기 보관 조건을 고려할 때 샘플의 양이 낮을 수 있습니다.
현재 널리 사용 가능한 코로나19 백신은 예방접종 후 6개월 이내에 대부분의 수혜자에게 심각한 질병에 대한 최상의 보호를 제공합니다8.고무적으로, SARS-CoV-26,7 변종의 빈약한 백신 유발 혈청학적 중화에도 불구하고, 야생형 SARS-CoV-2에 대한 백신 접종으로 유도된 T 세포 반응은 다른 25개 변종이 등장하면서 높은 반응성을 유지했습니다.여기에 제시된 데이터는 백신의 면역원성에 대한 광범위한 평가의 중요성을 보여주며, 바이러스의 갑작스러운 감염과 지속적인 전염을 예방하기에는 T 세포 면역력이 부족한 백신을 강조합니다.우리는 또한 모세혈관 코호트에 모집된 백신을 접종하지 않은 많은 개인이 이전 백신 접종과 상관없이 SARS-CoV-2 특이적 T 세포(및 N 결합 IgG)에 대해 상당한 반응을 보인 것을 관찰했는데, 이는 이전 감염 때문일 가능성이 높습니다.적절한 개인에게 백신을 접종하기보다는 현재 예방접종 상태와 정보에 입각한 선택을 바탕으로 감염 위험을 평가해야 합니다.
이 연구의 한계에는 면역의 관련성을 결정하기 위해 혈액 수집 후 참가자가 SARS-CoV-2 감염을 자가 보고했다는 보장이 포함됩니다.일부 참가자는 무증상 감염이 있을 수 있으며 코로나19에 대한 PCR 및/또는 측면 흐름 검사를 받을 수 없습니다.우리 데이터 세트에는 혈액 샘플링 당시 참가자의 약물에 대한 정보도 부족했습니다.또한 모든 참가자가 경증/중등도 증상만 보고했거나 증상이 없었다는 점을 고려하면, 코로나19로 인한 중증 질환 및 입원 위험 증가를 예측한 데이터 세트에서 면역 반응을 식별하는 것은 불가능했습니다.그러나 뉴클레오캡시드 특이적 에피토프에 대한 CD8+ T 세포 반응의 존재는 최근 중증 코로나1926에 대한 보호와 관련이 있는 것으로 나타났습니다.또한, 여기에 사용된 분석법은 감염된 환자와 접촉한 혈청 음성 의료 종사자에게 우선적으로 축적되는 것으로 최근 밝혀진 특정 초기 발현 SARS-CoV-2 비구조 단백질에 대한 T 세포 반응을 측정하지 않았습니다.이 연구에 따르면, 모집 당시 지역사회 전염이 만연하고 모집단 내 접촉 감염 가능성이 높다는 점을 고려할 때, 테스트에서 발견된 SARS-CoV-2 특이적 T 세포의 수도 제거 가능한 것으로 보입니다.우리 코호트의 무증상 감염.마지막으로, 우리는 이전 연구에서 SARS-CoV-214 특이적 T 세포 반응을 잘 식별하지 못했기 때문에 T 세포에 의한 인터루킨 2 생산을 측정하지 않았습니다. 그러나 IL-2 특이적 반응은 기존 교차 반응을 나타낼 수 있습니다.SARS-CoV-211 감염에 대한 방어와 관련된 세포.
종합해보면, 이러한 데이터는 SARS-CoV-2 특이적 T 세포 반응을 인구 규모 면역 측정에 통합하는 장기적인 종단적 연구의 근본적인 필요성을 강조합니다.이러한 노력은 T 세포 반응을 측정하는 새로운 모세혈액 검사의 개발로 도움을 받을 수 있습니다.
연구 프로젝트는 2021년 2월부터 2022년 3월까지 참가자를 모집했습니다. 정맥혈 샘플을 기증한 건강한 기증자 코호트(n = 148)는 주로 카디프 대학의 코로나19 선별 서비스에 참여하는 대학 직원과 학생 또는 미국 초등학교 직원으로 구성되었습니다. 카디프.모든 참가자는 건강했고 면역억제제를 복용한 적이 없다고 보고했습니다(특성은 표 1 참조).모세혈관 혈액 샘플을 기증한 참가자 집단에는 영국 전역의 모든 자발적인 기증자(18세 이상)가 포함되었습니다.2022년 1월 24일부터 3월 14일 사이에 342명의 참가자가 연구에 등록했으며 그 중 299명이 혈액 샘플을 실험실에 제출했습니다.많은 참가자들이 백신 접종을 받지 않았거나 자가면역 질환 및 암을 포함한 심각한 동반 질환을 보고했습니다(특성은 표 1 참조).이 연구는 Newcastle and North Tyneside 2 연구 윤리 위원회(ID IRAS: 294246)와 카디프 대학교 의과대학 연구 윤리 위원회(SREC 참조: SMREC 21/01)로부터 윤리적 승인을 받았습니다.모든 참가자는 포함되기 전에 서면 동의를 얻었습니다.참가자들은 본 연구에 참여함으로써 어떠한 보상도 받지 않았습니다.
정맥혈 샘플은 6 또는 10 ml 리튬 또는 나트륨 헤파린 진공채취기(BD)에 정맥 천자를 하여 채취했습니다.손가락 란셋을 사용하여 모세혈관 혈액 샘플을 채취한 후 헤파린 마이크로용기(BD)에 수집했습니다.최소 400μl의 혈액이 필요합니다.이 양보다 적은 샘플은 거부됩니다.샘플 거부의 다른 이유에는 대규모 응고 및/또는 용혈 및 분석을 위한 점성 혈장 수집 실패가 포함되었습니다(보조 그림 5).항체 반응을 평가하기 위해 총 299개의 모세혈 샘플을 사용할 수 있었고, 그 중 270개의 샘플도 T 세포 반응을 평가하는 데 사용할 수 있었습니다.
SARS-CoV-2 특이적 T 세포 반응은 COVID-19 Immuno-T 분석(ImmunoServ Ltd)을 사용하여 평가하고 이전에 설명한 대로 수행했습니다14.간단히 말하면, 각 참가자로부터 6ml 또는 10ml 나트륨 헤파린(BD) 정맥 진공채혈기를 채취하여 혈액 수집 후 12시간 이내에 실험실에서 처리했습니다.대부분의 검체는 24시간 이내에 처리되었지만, 400~600μl의 헤파린 미세출혈(BD) 모세혈관 혈액이 손가락 채혈 후 48시간 이내에 수집되었습니다.정맥 및/또는 모세혈관 샘플은 이전에 설명한 대로 SARS-CoV-2(야생형 변종)에 특이적인 별도의 펩타이드 풀로 자극되었습니다14.이 펩타이드 라이브러리에는 전체 스파이크 단백질(S1 및 S2)(S; NCBI 단백질: QHD43416 1), 뉴클레오캡시드 인단백질(NP; NCBI 단백질: QHD43423 2) 및 막 당단백질(M)에 걸쳐 11개의 중복 아미노산이 있는 420개의 15량체 서열이 포함되어 있습니다. NCBI 단백질: QHD43419 1) 코딩 서열("S-/NP-/M-조합 펩타이드 라이브러리"로 지칭됨).모든 펩타이드는 >70%로 정제되었고 멸균수에 용해되었으며 펩타이드당 0.5μg/ml의 최종 농도로 사용되었습니다.샘플을 37°C에서 20-24시간 동안 배양했습니다.그런 다음 튜브를 5000 xg에서 3분간 원심분리하고 ~150μl의 혈장을 각 혈액 샘플의 상단에서 수집했습니다.사이토카인/항체 검출 분석을 실행하기 전에 혈장 샘플을 -20°C에서 최대 1개월 동안 보관하십시오.
IFN-γ는 IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set(BioLegend, 카탈로그 번호 430116)을 사용하여 측정하고 제조업체의 지침에 따라 수행했습니다.정지 용액(2N H2SO4)을 첨가한 직후 BioLegend Mini ELISA 플레이트 판독기를 사용하여 450nm에서 마이크로플레이트를 판독했습니다.IFN-γ는 GraphPad Prism을 사용하여 표준 곡선 외삽법으로 정량화되었습니다.분석의 검출 하한보다 낮은 값은 7.8 pg/ml로 기록되었으며, 분석의 검출 상한을 초과하는 값은 1000 pg/ml로 기록되었습니다.
항-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG 항체는 Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-플렉스 패널(Bio-Rad, 카탈로그 번호 12014634)을 사용하여 측정되었으며 다음에 따라 표시되었습니다. 제조업체의 지침.지침 .정량 한계를 초과하는 값을 보고하는 샘플은 1:1000 희석으로 재분석되었습니다.비드의 평균 형광 강도는 Bio-Plex 200 기기(Bio-Rad)에서 측정되었습니다.항체 농도는 VIROTROL SARS-CoV-2 단일 대조 분석법(Bio-Rad)으로 계산하고 제조업체의 보정 계수를 사용하여 WHO/NIBSC 20/136 국제 참조 표준 단위(BAU/mL)로 변환했습니다.
SARS-CoV-2 야생형 및 델타(B.1.617) SARS-CoV-2 계통에 대한 RBD 및 S1 하위단위 특이적 중화항체는 Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit(Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit)를 사용하여 측정되었습니다. -Rad, 부품 번호 12016897), 제조업체의 지침에 따릅니다.Bio-Plex 200(Bio-Rad)에서 평균 형광 강도를 측정하고 다음 공식을 사용하여 억제율(즉, 중화)을 계산합니다.
SARS-CoV-2에 대한 감염성 중화 분석은 이전에 설명한 대로 수행되었습니다28.간단히 말하면, 야생형 SARS-CoV-2 600 PFU를 혈장의 3배 연속 희석액과 함께 37°C에서 1시간 동안 두 번 배양했습니다.이어서, 혼합물을 VeroE6 세포에 48시간 동안 첨가하였다.단층을 4% 파라포름알데히드로 고정하고, 0.5% NP-40으로 투과화시킨 후 차단 완충액(0.1% 트윈 및 3% 탈지유를 함유한 PBS)에서 1시간 동안 배양했습니다.1차 항체(항-뉴클레오캡시드 1C7, Stratech)를 차단 완충액에 첨가하여 실온에서 1시간 동안 방치하였다.세척 후 2차 항체(anti-mouse IgG-HRP, Pierce)를 차단 완충액에 첨가하여 1시간 동안 방치하였다.단층을 세척하고 Sigmafast OPD를 사용하여 현상한 후 Clariostar Omega 플레이트 판독기에서 판독했습니다.바이러스가 없는 웰, 바이러스는 없지만 항체가 없는 웰, 중간 활성을 보이는 정규화된 혈청을 각 실험에 대조군으로 포함시켰습니다.
통계 분석은 GraphPad Prism(버전 9.4.1)에서 수행되었습니다.데이터 세트의 정규성은 Shapiro-Wilk 테스트를 사용하여 테스트되었습니다.모든 비교에는 비모수적 기준이 사용되었습니다.Mann-Whitney 테스트는 짝이 없는 샘플에 사용되었습니다.모든 테스트는 P ≤ 0.05의 명목 유의 임계값을 사용하여 양면으로 수행되었습니다.
데이터세트의 초기 탐색적 분석은 R(버전 4.0.3)에서 수행되었습니다.여기에는 두 변수 간의 상관 관계가 사각형의 크기와 색상으로 표시되는 Spearman의 일변량 순위 상관 행렬 개발이 포함됩니다.연관성 간의 통계적 유의성은 Spearman의 로를 사용하여 계산되었으며, 여기서 0.05 이하의 값이 유의미한 것으로 간주되었습니다.통계적으로 유의미하지 않은 비교는 매트릭스에서 제외되고 빈 셀로 표시되었습니다.P-값은 Holm의 보정을 사용하여 다중 비교를 위해 조정되었습니다.이진 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 데이터세트의 변수가 코로나19에 대한 긍정적인 반응에 미치는 영향을 시뮬레이션했습니다.IFN-γ T 세포 반응과 항-RBD/S1/S2/N IgG 역가 점수는 요인으로 변환되었으며, 여기서 각 개인은 각 점수에 대한 적절한 사분위수에 할당되었습니다.이후 통계패키지(V4.0.3)의 glm 함수를 이용하여 초기 연구모델을 개발하였다.이 원본 모델에서 파생된 승산비는 OddsPlotty 패키지(V1.0.2)의 'odds_plot' 함수를 사용하여 모델의 계수에서 추출되었습니다.교차 검증 모델을 개발할 때 bestglm 패키지(V0.37.3)의 "bestglm" 기능을 사용하여 사용자 편향을 제한하고 최상의 예측 변수 하위 집합을 선택할 수 있도록 했습니다.선택한 방법은 "완전한" 방법이었고 모델 적합성을 평가하는 데 사용된 정보 기준은 AIC였습니다.위에서 설명한 것과 동일한 작업 흐름을 사용하여 승산비를 얻었습니다.
연구 설계에 대한 자세한 내용은 이 기사에 링크된 Nature 연구 초록을 참조하세요.
자료에 대한 편지와 요청은 Martin Scarr 박사나 Andrew Godkin 교수에게 전달되어야 합니다.이 글은 원본 데이터를 제공합니다.
통계 모델을 생성하는 데 사용되는 R 코드는 요청 없이 공개적으로 제공됩니다29.재인쇄 정보 및 라이센스는 www.nature.com/reprints에서 확인할 수 있습니다.
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